دانلود مقاله مواد و روش ها و انتخاب دام

مواد و روشها و انتخاب دام

1) آماده سازی تعداد 2000 اسلاید جهت تهیه گسترش خون از رگهای جداری و رگهای عمقی و بررسی ریزبینی

2) آماده سازی سوزنهای پونکسیون جهت تهیه بیوپسی از غدد لنفی سطحی

( بخصوص پیش کتفی) تهیه گسترش بمنظور بررسی ریزبینی

3) تهیه لوله های ونوجکت(Veno ject ) حدود 2000 عدد جهت گرفتن خون و تهیه سرم  و نگهداری آنها در منهای بیست در جه تا موقع انجام تست های سرمی( تست الیزا)

4) تهیه آنتی ژن لیوفیلیزه  وآنتی ژن سونیکه

1-4 روش تهیه آنتی ژن بیوفیلیزه جهت انجام تست تیلرین

سلولهای میلوئید آلوده به شیتروین تیلریااتولاتا (Schzour Infected mylord alls)  رااز پاساز های پائین سویه های جداشده تهیه نموده و سپس سلولهای تهیه شده را در دور rpm 1600با محلول PBS دوبار شستشو داده سپس برمبنای  کنسانتره سلولی را تهیه  نموده و در شیشه های مخصوص لیوفیلیزه 4 میلی لیتری و 8 میلی لیتری هر کدام یک میلی لینر تقسیم و سپس با دستگاه لیوفیلیزه آنها را لیوفیلیزه نموده و تا موقع مصرف در   نگهداری می گردند در موقع مصرف به هر شیشه یک میلی لتر آب دوبار تقطیر شده استریل اضافه نموده و پس از تکان دان بعنوان آنتی ژن از آن استفاده می شود لازم به یادآوری است که میزان سلول در کنسانتره باید باندازه ای باشد که غلظت پروتئین مورد لزوم برای تزریق بر مبنای در نظر گرفته می شود.

 2-4 روش تهیه آنتی ژن سونیکاسیون جهت انجام تست تیلرین

کنسانتره سلولهای میلوئید آلوده  به شیتروین تیلریااتولاتا همانند روش لیوفیلیزه تهیه نموده و تعداد سلول را در هر میلی لیتر به  میرسانیم و پس از دو بار شستشو با PBS در دور 1600 در دقیقه با دستاه سونیکاتور به برای مدت 5 دقیقه سونیکه نموده و در g 1000 به مدت ده دقیقه سانتریفوژ شده و به مدت سه بار با PBS شستشو داده می شود.

 انتخاب دام جهت بررسی های آزمایشگاهی

در طی سالهای 84-83 جمعاً چهار رأس گوساله هلندی بین 5-4 ماه از دامداریهایی که تیلریوز در سال گذشته نداشته انتخاب شدند و در اصطبل فاقد کنه(Tick free stall ) نگهداری شدند. گوساله ها مدت یک ما ه مورد بررسی های ضروری قرار گرفتند از عدم آلودگی آنها اطمینان حاصل شد و سپس جهت بررسی طرح تداوم ایمنیی مورد استفاده قرار گرفتند.

و مایع روئی به عنوان آنتی ژن درنظر گرفته می شود سپس توتال پروتئین آنتی ژن تهیه شده بر  مبنای  بدست آورده و آن را تا موقع مصرف در چهار درج سانتی گراد نگهداری مینمائیم.

روش تهیه آنتی ژن تیلر یا آنوکات به روش هموژنیزه با دستگاه (Homogenizer)

1) پاساژ سلول های میلوئید شیتروین تیلریااتولاتا در 10 ساعت به حجم تقریبی هر کدام 150ml (Rachani1992 )

2)  جمع آوری سلولها در شروع مرحله ایستا(Statcnary )

3) سانتریفوژ نمودن و حذف محیط کشت با سه بار شستشو در محیط PBS

4) ذوب و منجمدنمودن سلولها در  و برای دوبار

5)  هموژنیزه کردن سلولها د رسه سیکل 10 دقیقه در دور( 260prm )

6) دوبار ذوب و انجماد نمودن مجدد

7) سانتریفوژ در دو نوبت در دور 2000g به مدت 30 دقیقه

8)  استفاده از مایع روئی بعنوان آنتی ژن

9) پروتئین سنجی اندازه گیری پروتئین تنظیم آنتی ژن بر مبنای غلظت توتال پروتئین

انتخاب دام جهت بررسی های صحرائی

د رتاریخ 31/6/83 و 7/7/83 طبق ضوابط ذیل جمعاض 92 رأس زا هفت گاوداری با نظر متخصص اپیدمیولوژیک انتخاب گردید ضوابط ددر نظر گرفته جهت انتخاب دامهای تحت بررسی عبارت بودند از:

 1) عاری بودن دامها از الودگی های تک یاخته ای

2) مناسب بودن وضع عمومی دامها با اشتهای خوب و علائم لاغری

3) عدم آلودگی به بیماری های باکتریائی ، ویروسی و قارچی

4) عدم آلودگی به انگل های درونی

5) مایه کوبی مرتب بر علیه بیماریهای باکتریایی و ویروسی( شاربن، پاستروازر،  طاعون، تب فرچکی و  شاربن غلاتتی در اسنفد ماه 1384 کلیه دامهای گروه اول واکسینه شده گروههای دوم و سوم واکسینه نشده اند.

در تاریخ 31/2/84 از کلیه دامهای گاوداری اصغر خراشانی که قبلاً مایه کوبی بر ضد تیلریوز شده تست لوزبر تست تیلرین با آنتی ژن لیوفیلیزه و آنتی ژن سونیک تیلر یا آنکوتا اتنجام گردید به منظور انجام تست الیزا خون گیری انجام و گسترش خونی نیتر از کلیه دامها تهیه گردید.( تعداد داام تست بررسی در این گاوداری برای 8 رأس می باشد)

در تاریخ 31/2/84 ازکلیه دامهای گاوداری،  رسول خراسانی که قبلاً مایه کوبی بر ضد تیلریور شده بودند تست تیلیرین بااستفاده از آنتی ژن لیونیلیزه و آنتی ژن سونیکه  تیلر  یا آنرکلاتا انجام گردی بمنظور انجام تست FLISH خون گیری انجام شد و گسترش خون نیز تهیه گردید.( تعداد دادم تحت بررسی در این گاوداری برابر  24 رأس می باشد)

در تاریخ 1/3/84 از کلیه دامهای گاوداری اباصط رضائی که قبلاً  برضد تیلرلوز مایه کوبی شده بودند تست تیلرین با استفاده از آنتی ژن لیونیلیزه و آنتی ژن سونیکه تیلر یا آنوکاتا انجام گردید و بمنظور انجام تست الیزا(ELISA )  خون گیری انجم شده و گسترش خون نیز تهیه گردید( تعداد دام تحت بررسی در  این گاوداری برابر 2 رأس می باشد.

 در تاریخ 1/3/84 از کلیه دامهای گاوداری موسی رضائی که قبلاً بر ضد تیلرلوز مایه کوبی شده بودند تست تیلرین با استفاده از آنتی ژن بیونیلیزه و آنتی ژن سونیکه تیلر یا آنولاتا انجام گردید و بمنظور انجام تست الیزا(ELISA ) خون گیری انجام شد و گسترش خون نیز تهیه گردید( تعداد دام تحت بررسی در این گاوداری برابر 2 رأس می باشد)

در تاریخ 4/4/84 از کلیه دامهای گاوداری حاج رضا زندی تست تیلرین با استفاده از آنتی ژن بیونیلیزه و آنتی ژن سونیکه تیلر یا آنولاتا انجام شد و خون گیری جهت انجام تست الیزا انجام  و گسترش خون نیز تهیه گردید.

( تعداد دام تحت بررسی در این گاوداری برابر 9/1 رأس می باشد)

در تاریخ 4/4/84 از کلیه دامهای گاوداری ناصر  جباری که قبلاً بر ضد تیلریوز مایه کوبی شده بودند تست تیلرین با استفاده از آنتی ژن بیونیلیزه تیلر یا آنوکاتا انجام شد و جهت تست الیزا خون گیری انجام گردید و ضمناً گسترش خون نیز تهیه گردید( تعداد دام تحت بررسی در این گاوداری برابر 5 رأس می باشد)

در تاریخ 4/484 از کلیه دامهای گاوداری حاج اکبر زندی که قبلا ً بر ضد تیلریوز مایه کوبی شده بودند تست تیلرین  با استفاده از آنتی ژن بیونیلیزه تیلر یا آنولاتا انجام شده و جهت تست الیز خون گیری انجام گردید و ضمناً گسترش خون نیز تهیه گردید( تعداد دام تحت بررسی در این گاوداری برابر 8 رأس بوده است)